GC-IRMSの利用と分析依頼

当研究室のガスクロマトグラフ-同位体比質量分析計（GC-IRMS）を用いたアミノ酸の安定窒素同位体比測定は，北海道大学のオープンファシリティに登録されており，国内外の大学・研究機関のみならず，企業や個人の誰もが利用することができます。
アミノ酸の安定窒素同位体比測定の他，脂質（バイオマーカー）の安定炭素・水素同位体比の測定も可能です。また，GC-IRMS用に前処理済みの有機化合物を持ち込む場合には，アミノ酸，脂質のみならず，様々な有機化合物の測定（水素・炭素・窒素同位体比，酸素同位体比は除く）が可能です。GC-IRMSの利用を希望する方は，e-mailもしくは電話にて，力石（ychikaraishi_AT_lowtem.hokudai.ac.jp，011-706-5472）または滝沢（takizaway_AT_lowtem.hokudai.ac.jp, 011-706-5486）にご相談ください。
 注： 安定酸素同位体比に関しては，国際的に認められた（有機化合物の）標準物質が存在しないため，いかなる試料に関しても，測定を受け入れていません。
  

料金表

セルフ分析と委託分析の２つの方法があります。

• セルフ分析： 利用者に当研究室に来て頂き，利用者自身がGC-IRMSを動かして，同位体比分析を行う方法で，試料の前処理も含めて研究室（ファシリティ）を使用した時間で，料金が発生します。
• 委託分析： 利用者の試料を，当研究室のスタッフが測定（前処理を含む）する方法で，4日間，5日間のセット料金になります。また，利用者が前処理した試料を，利用者の希望に添って，当研究室のスタッフが測定する，という利用方法もあります。

 
セルフ分析

  初めて利用する方で，使い方の講習が必要な方には，初回講習（10:00-12:00, 13:30-18:30の合計8時間）を行います。初回講習を受けずに利用し，GC-IRMS等に損傷を与えた場合には，修理費の実費を負担して頂きます。
 
委託分析

 

 

 
 
8試料まで同時に行うことができますので，1試料でも8試料でも同じ料金になります。
「4日」は，8試料の測定がギリギリ収まる日数になりますので，研究室のスタッフのみで分析を行います。一方で，「5日」は，8試料の分析が余裕をもって行える日数になりますので，スタッフに加えて，博士研究員や学生と共に分析を行います。「4日」と「5日」では，料金が大きく異なりますが，前者は，分析のみの料金，後者は，分析に加えて，次世代の技術者（博士研究員や学生）を教育する費用が含まれていると理解して下さい。次世代の技術者の教育を支援して頂ける方や，研究資金に余裕がある方は，「5日」で依頼して頂けると嬉しいです。
 

受託分析（4日,5日）で，準備していただく試料 

一般的に，アミノ酸の安定窒素同位体比測定には，タンパク質量（乾燥重量）で約1.0mgの試料量を準備し，そのうちの0.1〜0.2mgを分析に用います。0.1mg以下の試料に関しては，いくつかの試料を混ぜるなどして，できるだけ1.0mg（最低でも0.1mg）以上になるように準備して下さい。
殻，骨，土壌，堆積物などの試料は，イオン交換処理やその他の精製処理が必要なため，委託分析「4日，5日」は，利用できません。
 

前処理方法と測定可能なアミノ酸

前処理は以下の方法で行います。

• 12M 塩酸で加水分解（110℃, 12時間）
• n-ヘキサン/ジクロロメタン（3/2, v/v）で3回洗浄し，脂質成分を除去
• メタノールを加え，窒素ガスを吹き付け，乾燥
• 塩化チオニル/イソプロパノール（1/4, v/v）でエステル化（100℃，2時間）
• 塩化ピバロニル/ジクロロメタン（1/4, v/v）でピバロニル化（100℃，2時間）
• ピバロニル-アミノ酸-イソプロピルエステル誘導体を，n-ヘキサン/ジクロロメタン（3/2, v/v）0.3mLで，抽出

分析可能なアミノ酸は以下の8種類です。
アラニン，グリシン，バリン，ロイシン，イソロイシン，グルタミン酸，フェニルアラニン，ヒドロキシプロリン
ただし，実際に測定可能かどうかは，含有量や，GCクロマトグラム上での夾雑物（不純物）ピークとの分離状況によります。また，グルタミンは加水分解でグルタミン酸になりますので，上記のグルタミン酸の同位体比は，グルタミンのα位窒素も含みます。
 

使用する分析装置と測定の確度・精度

• ガスクロマトグラフ: Agilent 7890B
• 導入法: PTV
• GCカラム: Agilent Ultra-2 (50m, 0.32mm, 0.52um)
• オートサンプラー: Gerster MPS
• インターフェイス: Thermo GC Combustion III (Oxidation and Reduction furnaces)
• 同位体比質量分析計: Thermo Delta V
• 標準物質（Isotopic reference materials）: Ala, Gly, Val, Leu, Nle, Asp, Met, Gly, Phe, Hyp (Indiana大学, Shoko Science社より購入)
• 確度 (mean of cap-delta): 0‰ in general
• 精度 (mean of 1 sigma): 0.4-0.8‰ in general

分析に必要な日数

おおむね，3ヶ月です。 
 

論文等の著者の扱い

委託分析業務のみで，測定者の名前を著者のリストに入れる必要はありません。ただし，謝辞等を利用して，同位体比測定の責任が当研究室にあることを明記して下さい。また，得られた測定結果に関して，測定者や研究室のメンバーが，著者のリストに入るべき十分な議論を行った場合には，著者のリストに入れて下さい。